Puchacz większy to drapieżnik szczytowy z niewieloma naturalnymi wrogami, ale kilka gatunków go poluje:
- Orły Złote: duże, potężne drapieżnice polujące na puchaczy większych.
- Jastrzębie Północne: zwinne leśne łowcy, atakujące z drzew.
- Puchacze Szołowe: potężne sowy polujące cicho w lasach, mogą polować na puchaczy większych.